酶活性測定法按反應時間分類：

1.按反應時間分類法：20世紀50年代以前大都使用固定時間法。這種方法是以酶催化反應的平均速度來計算酶的活性，現(xiàn)多已不用。50年代中期開始采用連續(xù)監(jiān)測法。這種方法用自動生化分析儀上完成，可以測酶反應的初速度，其結(jié)果遠比固定時間法準確，在高濃度標本尤為明顯，但本法也受到反應時間，反應溫度，試劑等的影響，應加以注意。

（1）定時法：（兩點法）

通過測定酶反應開始后某一時間段內(nèi)（t1到t2）產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來求取酶反應初速度的方法。其中t1往往取反應開始的時間。

酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時間醫(yī)學教育網(wǎng)|搜集整理，通過加入強酸、強堿、蛋白沉淀劑等，使反應完全停止（也叫中止反應法）。加入試劑進入化學反應呈色測出底物和產(chǎn)物的變化。

該法最基本的一點是停止反應后才測定底物或物的變化。

優(yōu)點：簡單易行，對試劑要求不高。

缺點：難保證測定結(jié)果的真實性。

難以確定反應時間段酶促反應是否處于線性期。隨著保溫時間的延續(xù)，酶變性失活加速。

（2）連續(xù)監(jiān)測法：又稱為動力學法或速率法、連續(xù)反應法。

在酶反應過程中，用儀器監(jiān)測某一反應產(chǎn)物或底物濃度隨時間的變化所發(fā)生的改變，通過計算求出酶反應初速度。

連續(xù)監(jiān)測法根據(jù)連續(xù)測得的數(shù)據(jù)，可選擇線性期的底物或產(chǎn)物變化速率用于計算酶活力。

因此連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性比定時法更準確。

實際工作中，采用工具酶的酶偶聯(lián)法已經(jīng)成為應用最廣、最頻繁測酶活性濃度的方法。

（3）平衡法：通過測定酶反應開始至反應達到平衡時產(chǎn)物或底物濃度總變化量來求出酶活力的方法，又叫終點法。