血清胱抑素C及其臨床應(yīng)用是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技士會(huì)涉及到的知識(shí)點(diǎn)，醫(yī)學(xué)教育|網(wǎng)搜集整理，請(qǐng)參考。

血清胱抑素C及其臨床應(yīng)用：

胱抑素C（CystatinC，簡(jiǎn)稱CysC）亦稱半胱氨酸蛋白酶抑制劑C，是一種由120個(gè)氨基酸組成，分子量為13kDa的低分子量、堿性非糖化蛋白質(zhì)。CysC基因在包括腎、肝、胰、腸、胃、肺及胎盤(pán)等所有組織中持續(xù)地轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)CysC是半胱氨酸蛋白酶抑制物家族的成員之一，是目前發(fā)現(xiàn)的對(duì)組織蛋白酶B抑制作用最強(qiáng)的抑制物。同時(shí)CysC對(duì)木瓜蛋白酶、無(wú)花果蛋白酶、組織蛋白酶H及L也有抑制。

目前臨床常用的腎功能檢測(cè)以血肌酐、尿素氮等檢測(cè)為主。血清尿素氮首先被作為腎功能的評(píng)價(jià)指標(biāo)，但在臨床應(yīng)用中存在一定的缺陷，因?yàn)楫?dāng)腎小球?yàn)V過(guò)率（glomerularfiltrationrate，GFR）減少到正常值的40%以前，尿素氮濃度升高緩慢，并且其血清濃度與外源性（蛋白質(zhì)攝入量）與內(nèi)源性（感染、腎上腺皮質(zhì)激素的應(yīng)用、胃腸出血等）尿素負(fù)荷的大小有關(guān)；更重要的是腎小管對(duì)尿素氮有明顯的被動(dòng)重吸收，因此尿素氮不符合GFR內(nèi)源性標(biāo)志物要求。肌酐基本符合內(nèi)源性GFR標(biāo)志物的要求，目前國(guó)內(nèi)外仍用血清肌酐作為臨床常規(guī)評(píng)估腎小球?yàn)V過(guò)功能受損的指標(biāo)。但只有當(dāng)GFR下降接近一半時(shí)，血清肌酐才有明顯的變化，且其血清含量受性別、飲食、肌肉量等因素的影響。因此，腎功能損害的敏感血清學(xué)指標(biāo)的研究一直是臨床檢驗(yàn)研究的熱點(diǎn)之一。

已有研究證實(shí)CysC血清濃度與腎功能損害程度高度相關(guān)，能夠準(zhǔn)確反映人體GFR的變化。臨床專家通過(guò)研究血中β2-微球蛋白、視黃醇結(jié)合蛋白、CysC濃度與GFR的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)CysC血清濃度與GFR的相關(guān)性最好，認(rèn)為CysC是低分子量蛋白質(zhì)中與GFR最相關(guān)的內(nèi)源性標(biāo)志物，甚至優(yōu)于血清肌酐。因其基因?qū)儆?ldquo;看家基因”，CysC蛋白具有產(chǎn)生率及釋放入血速率恒定，能自由通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)，在近曲小管全部重吸收并迅速代謝分解，不和其他蛋白形成復(fù)合物等特點(diǎn)。其血清濃度變化不受炎癥、感染、腫瘤及肝功能等因素的影響，與性別、飲食、體表面積、肌肉量無(wú)關(guān)，是一種反映GFR變化的理想的內(nèi)源性標(biāo)志物。

CysC因其自身特性越來(lái)越多地被用于糖尿病腎病腎臟濾過(guò)功能早期損傷的評(píng)價(jià)、高血壓腎功能損害早期診斷、腎移植病人腎功能的恢復(fù)情況評(píng)估、血液透析患者腎功能改變監(jiān)測(cè)、老年人腎功能評(píng)價(jià)、兒科腎病的診斷、腫瘤化療中腎功能的監(jiān)測(cè)等。

糖尿病腎損害是糖尿病嚴(yán)重的慢性微血管并發(fā)癥，也是糖尿患者的主要死因之一。腎損害在糖尿病早期就已開(kāi)始，但此階段病情較隱匿，通常無(wú)明顯臨床癥狀，而臨床實(shí)驗(yàn)室常規(guī)腎功能檢測(cè)因靈敏度低難以檢出，因此糖尿病早期腎臟損害的發(fā)生和發(fā)展極易被忽視。臨床專家通過(guò)比較早期糖尿病患者血清CysC．血肌酐及內(nèi)生肌酐清除率與GFR的相關(guān)性，結(jié)果表明CysC與GFR具有更好的相關(guān)性，同時(shí)ROC評(píng)價(jià)也表明CysC的分析靈敏度和特異性均好于血肌酐及內(nèi)生肌酐清除率，認(rèn)為使用CysC檢測(cè)可為糖尿病腎損害的早期診斷提供準(zhǔn)確可靠的臨床檢驗(yàn)指標(biāo)。

高血壓所致腎損害是高血壓常見(jiàn)并發(fā)癥，早期干預(yù)可改善高血壓患者的預(yù)后。高血壓是通過(guò)引起良性小動(dòng)脈腎硬化而導(dǎo)致高血壓慢性腎損害，臨床研究表明在良性小動(dòng)脈腎硬化出現(xiàn)臨床癥狀之前，常規(guī)血液及尿液檢查都還正常時(shí)，CysC血清濃度即出現(xiàn)異常，表明GFR已經(jīng)改變，慢性腎損害已發(fā)生，因此通過(guò)檢測(cè)CysC可為及早干預(yù)治療高血壓所致腎損害提供可靠的臨床指標(biāo)醫(yī)`學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。

腎移植患者用血清CysC評(píng)價(jià)移植腎功能，國(guó)外已有較多的研究。已有研究表明CysC在腎移植術(shù)后腎功能監(jiān)測(cè)中具有很高的臨床應(yīng)用價(jià)值，尤其是術(shù)后出現(xiàn)感染時(shí)具有早期診斷價(jià)值。相比目前臨床廣泛使用的腎功能監(jiān)測(cè)指標(biāo)，CysC能更及時(shí)、靈敏、準(zhǔn)確地反映腎移植術(shù)后腎功能的變化，對(duì)腎移植術(shù)后感染和急性排斥的早期診斷有著明顯的優(yōu)勢(shì)。

基于CysC的特性和臨床應(yīng)用價(jià)值，加之因CysC血清濃度較低，測(cè)定方法需較高的分析靈敏度及特異性，檢測(cè)CysC的靈敏方法也在不斷發(fā)展。早期有單向免疫擴(kuò)散法及酶免疫測(cè)定法，這兩種測(cè)定方法靈敏度低。隨后相繼出現(xiàn)較為靈敏的放射、熒光及各種酶免疫測(cè)定方法。這些測(cè)定方法都為非均相檢測(cè)，操作復(fù)雜且耗時(shí)長(zhǎng)，不便廣泛臨床應(yīng)用。最近出現(xiàn)了測(cè)定CysC的膠乳顆粒增強(qiáng)免疫比濁法，此方法為均相測(cè)定，測(cè)定時(shí)間短，因此該測(cè)定方法的研究也成為國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。

膠乳顆粒增強(qiáng)免疫比濁法CysC測(cè)定是利用血清樣品中的CysC與檢測(cè)試劑中適量的特異性標(biāo)記抗體結(jié)合，形成不溶性的免疫復(fù)合物，反應(yīng)液吸光度改變的大小與樣品中的CysC含量呈正相關(guān)的原理進(jìn)行。該方法可在全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行常規(guī)血清測(cè)定。由中生北控生物科技股份有限公司新近自主研發(fā)的顆粒增強(qiáng)免疫比濁法血清CysC液體雙試劑測(cè)定試劑盒，采用納米級(jí)膠體金標(biāo)記抗體試劑，有效提高了檢測(cè)的靈敏度。該試劑盒經(jīng)過(guò)在衛(wèi)生部北京醫(yī)院和中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院阜外心血管病醫(yī)院嚴(yán)格的臨床試驗(yàn)，檢測(cè)性能與進(jìn)口試劑盒相關(guān)性良好，并已開(kāi)始臨床推廣。

研發(fā)手記

血清胱抑素C是腎小球?yàn)V過(guò)率優(yōu)良的內(nèi)源性標(biāo)志物，能夠準(zhǔn)確地反映腎損害程度，逐漸受到臨床專家的重視，臨床急需該項(xiàng)目的檢測(cè)方法和檢測(cè)試劑。因胱抑素C血清濃度較低，測(cè)定方法需較高的分析靈敏度及特異性，各種檢測(cè)的方法也在不斷發(fā)展。早期有單向免疫擴(kuò)散法及酶免疫測(cè)定法，這兩種測(cè)定方法操作復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)且靈敏度低。隨后相繼出現(xiàn)較簡(jiǎn)單靈敏的放射、熒光及各種酶免疫測(cè)定方法，在一定程度上改善和提高了測(cè)定的簡(jiǎn)便性和可靠性。上世紀(jì)90年代出現(xiàn)了一種夾心酶免疫測(cè)定方法，檢測(cè)靈敏度高，但測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)。這些測(cè)定方法都屬非均相測(cè)定方法，操作煩瑣，部分方法存在污染，未能在臨床上得到廣泛應(yīng)用。為滿足臨床檢驗(yàn)的需要，中生北控生物科技股份有限公司在2007年初立項(xiàng)自主研制血清胱抑素C測(cè)定試劑盒。

2007年4月，此項(xiàng)目正式進(jìn)入研發(fā)階段。根據(jù)文獻(xiàn)調(diào)研，確定試劑盒的反應(yīng)原理及劑型。試劑盒利用抗原抗體結(jié)合產(chǎn)生凝聚的原理，根據(jù)該項(xiàng)目檢測(cè)靈敏度的要求，采用顆粒增強(qiáng)免疫比濁法液體雙試劑劑型。研發(fā)人員分別對(duì)反應(yīng)體系中的緩沖系統(tǒng)、抗體原料進(jìn)行了篩選，確定原料種類、來(lái)源及緩沖系統(tǒng)。對(duì)標(biāo)記抗體的制備和反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化，最終確定了試劑盒配方。該試劑盒的R2選擇納米級(jí)膠體金作為胱抑素C抗體的標(biāo)記物，在反應(yīng)過(guò)程中標(biāo)記胱抑素C抗體和血清中的抗原結(jié)合而發(fā)生凝聚，反應(yīng)液在特定波長(zhǎng)下吸光度發(fā)生改變以達(dá)到檢測(cè)目的。經(jīng)過(guò)標(biāo)記的抗體提高了試劑檢測(cè)靈敏度，最低檢測(cè)限達(dá)到毫克級(jí)，完全滿足了臨床檢測(cè)靈敏度的要求。經(jīng)過(guò)全面的性能測(cè)試，試劑具有檢測(cè)范圍寬，重復(fù)性好，抗干擾性強(qiáng)的特點(diǎn)。試劑應(yīng)用多點(diǎn)定標(biāo)和非線性校準(zhǔn)，可在全自動(dòng)生化分析儀上自動(dòng)完成，檢測(cè)時(shí)間縮短至10分鐘以內(nèi)，極大地方便了臨床檢測(cè)應(yīng)用。

2008年12月至2009年5月，該試劑盒在衛(wèi)生部北京醫(yī)院和中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院阜外心血管病醫(yī)院完成臨床試驗(yàn)，經(jīng)過(guò)嚴(yán)格規(guī)范的實(shí)驗(yàn)，分別對(duì)試劑盒的最低檢測(cè)限、精密度、測(cè)定范圍、抗干擾性、相關(guān)性等指標(biāo)進(jìn)行了臨床測(cè)試，結(jié)果與進(jìn)口試劑相關(guān)性良好。在2009年11月，經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的現(xiàn)場(chǎng)考核，研發(fā)程序和試劑現(xiàn)場(chǎng)抽樣程序，試劑盒順利通過(guò)質(zhì)量體系考核，為試劑盒完成注冊(cè)打下良好基礎(chǔ)。