血紅蛋白測定

（一）檢測原理血液中血紅蛋白以各種形式存在，包括：氧合血紅蛋白、碳氧血紅蛋白、高鐵血紅蛋白（Hi）或其他衍生物。采用比色法測定，包括：氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）測定法、十二烷基硫酸鈉血紅蛋白（SDS）測定法、疊氮高鐵血紅蛋白（HiN3）法、堿羥血紅蛋白法、溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血紅蛋白測定法等。

1.HiCN測定法原理：血液中除硫化血紅蛋白（SHb）外的各種Hb均可被高鐵氰化鉀氧化為高鐵血紅蛋白，再和CN一結合生成穩(wěn)定的棕紅色復合物-氰化高鐵血紅蛋白，其在540nm處有一吸收峰，用分光光度計測定該處的吸光度，經換算即可得到每升血液中的血紅蛋白濃度，或通過制備的標準曲線查得血紅蛋白濃度。

2.SDS測定法原理:血液中除SHb外的各種Hb均可與低濃度SDS作用，生成SDS-Hb棕紅色化合物，其吸收曲線波峰在538nm，波谷在500nm，肩峰在560nm，用分光光度計測定波峰處吸光度，經換算可得到每升血液中的血紅蛋白濃度。

（二）方法學評價

1.HiCN法:1966年被ICSH推薦為參考方法。該法具有操作簡單、顯色快、結果穩(wěn)定可靠、讀取吸光度后可直接定值等優(yōu)點。其致命的弱點是氰化鉀（KCN）試劑有劇毒，使用管理不當可造成公害。

2.SDS測定法：該法具有操作簡單、呈色穩(wěn)定、準確性和精確性符合要求、無公害等優(yōu)點。但由于摩爾消光系數(shù)尚未最后確認，不能直接用吸光度計算Hb濃度，而且SDS試劑的質量差異較大會影響檢測結果。

3.HiN3測定法：該法優(yōu)點與HiCN測定法相似，最大吸收峰在542nm，顯色快，結果穩(wěn)定，試劑毒性僅為HiCN測定法的1／7，但仍存在公害問題。

4.堿羥血紅蛋白（AHD575）測定法：該法試劑簡單，呈色穩(wěn)定，無公害，吸收峰在575nm，可用氯化血紅素作為標準品。但儀器多采用540nm左右濾光板，限制了此法使用。

5.CTAB血紅蛋白測定法該法試劑溶血性強又不破壞白細胞，適用于儀器上自動檢測Hb和白細胞。缺點是測定結果的準確度和精密度不佳。

6.多參數(shù)血細胞分析儀:優(yōu)點是操作簡單、快速，同時可獲得多項紅細胞參數(shù)，血紅蛋白測定原理與手工法相似，儀器法測定精度（CV）約為l%。

（三）質量控制

1.樣本異常血漿蛋白質、高脂血癥、白細胞數(shù)超過30×109/L、脂滴等可產生濁度，干擾Hb測定。

2.采血部位：部位不同，結果不同，靜脈血比毛細血管血低10%～15%。

3.結果分析：測定值假性增高的原因是稀釋倍數(shù)不準、紅細胞溶解不當、血漿中脂質或蛋白質量增加。

4.HiCN參考液：是制備標準曲線、計算K值、校準儀器和其他測定方法的重要物質。

ICSH公布了制備方法和規(guī)格，我國HiCN部級參考品質量標準為：

（1）圖形掃描波峰（540±1）nm，波谷502～504nm。

（2）Aλ540nm／Aλ504nm＝1.590～1.630。

（3）Aλ750nm≤0.002.

（4）無菌試驗：普通培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)陰性。

（5）精密度：隨機抽樣10支測定，CV≤0.5%。

（6）準確度：以WH0的HiCN參考品為標準進行測定，測定值與標示值之差≤±O.5%。

（7）穩(wěn)定性：3年內不變質，測定值不變。

（8）分裝于棕色安瓿內，每支不少于10ml。

（9）標簽應寫明產品名稱、批號、含量、有效期、生產日期、貯存法等。

5.質控物：常用質控物有：ACD抗凝全血、進口全血質控物、醛化半固定紅細胞、溶血液和凍干全血等。

（四）參考值：成年：男性120～170g／L；女性：110～150g／L。新生兒：170～200g／L。老年（70歲以上）：男性94.2～122.2g／L；女性86.5～111.8g／L。

（五）臨床意義

1.生理性變化

（1）年齡：隨年齡增長，Hb可增高或減低，和紅細胞變化相似。

（2）時間：紅細胞和血紅蛋白量有日內波動，上午7時達高峰，隨后下降。

2.病理性變化：血紅蛋白測定臨床意義和紅細胞計數(shù)相似，但在貧血程度的判斷優(yōu)于紅細胞計數(shù)。需注意的是：

（1）某些疾病，血紅蛋白和紅細胞濃度不一定能正確反映全身紅細胞的總容量。如大量失血時，在補充液體前，雖循環(huán)血容量縮小，但血液濃度很少變化，從血紅蛋白濃度來看，很難反映出存在貧血。如水潴留時，血漿容量增大，即使紅細胞容量正常，但血液濃度減低，從血紅蛋白濃度來看，已存在貧血，反之，失水時，血漿容量縮小，即使血液濃度增高，但紅細胞容量減少，從血紅蛋白濃度來看，貧血不明顯。

（2）發(fā)生大細胞性貧血或小細胞低色素性貧血時，紅細胞計數(shù)與血紅蛋白濃度不成比例。大細胞性貧血的血紅蛋白濃度相對偏高，小細胞低色素貧血的血紅蛋白減低，但紅細胞計數(shù)可正常。