酶活性和質(zhì)量測定方法及其評價(jià)

1.酶活性測定方法

（1）按反應(yīng)時(shí)間分類法：20世紀(jì)50年代以前大都使用固定時(shí)間法。這種方法是以酶催化反應(yīng)的平均速度來計(jì)算酶的活性，現(xiàn)多已不用。20世紀(jì)50年代中期開始采用連續(xù)監(jiān)測法。這種方法在自動(dòng)生化分析儀上完成，可以測酶反應(yīng)的初速度，其結(jié)果比固定時(shí)間法準(zhǔn)確，在高濃度標(biāo)本尤為明顯，但本法也受到反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度和試劑等的影響，應(yīng)加以注意。

1）定時(shí)法：通過測定酶反應(yīng)開始后某一時(shí)間段內(nèi)（t1到t2）產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來求取酶反應(yīng)初速度的方法，稱為兩點(diǎn)法，其中t1往往取反應(yīng)開始的時(shí)間。在酶反應(yīng)一定時(shí)間后，往往通過加入強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、蛋白沉淀劑等，使反應(yīng)完全停止，所以也叫中止反應(yīng)法。

2）連續(xù)監(jiān)測法：又稱為動(dòng)力學(xué)法或速率法、連續(xù)反應(yīng)法。在酶反應(yīng)過程中，用儀器監(jiān)測某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物濃度隨時(shí)間的變化所發(fā)生的改變，通過計(jì)算求出酶反應(yīng)初速度。

3）平衡法：通過測定酶反應(yīng)開始至反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)產(chǎn)物或底物濃度總變化量來求出酶活力的方法，又叫終點(diǎn)法。

（2）按監(jiān)測方法分類法：可分為：①分光光度法；②旋光法；③熒光法；④電化學(xué)方法；⑤化學(xué)反應(yīng)法；⑥核素測定法；⑦量熱法。

2.酶質(zhì)量測定法:隨著免疫技術(shù)的發(fā)展，出現(xiàn)了利用酶的抗原性，通過抗原、抗體反應(yīng)來直接測定酶的質(zhì)量，直接用質(zhì)量單位ng/mL、μg/L來表示酶含量的高低。免疫學(xué)方法與測定活性方法相比，其優(yōu)點(diǎn)是靈敏度和特異性高，不受體液中其他物質(zhì)的影響，特別是抑制劑和激活劑的影響，當(dāng)血液中有酶抑制劑存在，或因基因缺陷，合成了無活性的酶蛋白時(shí)，可以測出滅活的酶蛋白量，有利于疾病診斷和科學(xué)研究。如肌酸激酶同工酶MB（CKMB）質(zhì)量測定較活性測定對疾病的診斷價(jià)值高。