吞噬細(xì)胞功能檢測技術(shù)
體內(nèi)具有吞噬功能的細(xì)胞群稱為吞噬細(xì)胞，按其形態(tài)的大小分兩類：一類為大吞噬細(xì)胞即單核一吞噬細(xì)胞系統(tǒng)（MPS），包括血液中的大單核細(xì)胞及其進(jìn)入各種組織后發(fā)育而成的巨噬細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞等；另一類為小吞噬細(xì)胞，亦即中性粒細(xì)胞。
大吞噬細(xì)胞除能非特異性地吞噬殺滅病原體、衰老病殘和突變的細(xì)胞外，還在特異性免疫形成過程中，參與抗原識別和遞呈，生成多種細(xì)胞因子，參與遲發(fā)型**反應(yīng)和多種自身免疫性疾病的病理損傷。小吞噬細(xì)胞以吞噬功能為主，發(fā)揮非特異性免疫防疫作用并參與機(jī)體的免疫應(yīng)答炎癥損傷等。吞噬細(xì)胞的吞噬活動大體分為趨化、吞噬和胞內(nèi)殺滅作用三個階段，據(jù)此建立相應(yīng)的檢測方法。
一、中性粒細(xì)胞功能檢測
（一）趨化功能檢測
1.原理 中性粒細(xì)胞在趨化因子如微生物的細(xì)胞成分及其代謝產(chǎn)物、補(bǔ)體活性片段（C5a、C3a）、某些細(xì)胞因子等作用下產(chǎn)生趨化運(yùn)動，其趨化運(yùn)動強(qiáng)度可反映中性粒細(xì)胞的趨化功能。
2.方法學(xué)
（1）濾膜滲透法（Boyden小室法）
（2）瓊脂糖平板法
（二）吞噬和殺菌功能測定
1.顯微鏡檢查法 將白細(xì)胞與葡萄球菌或白色念珠菌懸液混合溫育，涂片，固定，堿性亞甲藍(lán)液染色。在油鏡下觀察靶細(xì)胞對細(xì)菌的吞噬情況，計數(shù)吞噬細(xì)菌和未吞噬細(xì)菌的白細(xì)胞數(shù)。對有吞噬作用的白細(xì)胞，應(yīng)同時記錄所吞噬的細(xì)菌數(shù)。
2.溶菌法 將白細(xì)胞懸液與經(jīng)新鮮人血清調(diào)理過的細(xì)菌（大腸桿菌或金黃色葡萄球菌）按一定比例混合，溫育。每隔一定時間取定量培養(yǎng)物，稀釋后接種固體平板培養(yǎng)基。37℃培養(yǎng)18小時后，計數(shù)生長菌落數(shù)，以了解中性粒細(xì)胞的殺菌能力。
3.NBT還原試驗(yàn)
二、巨噬細(xì)胞功能檢測
人噬細(xì)胞一般從外周血或經(jīng)斑蝥敷貼形成的皮泡液中獲取，也可從肺泡灌洗液或患者腹膜透析液中分離。實(shí)驗(yàn)室用于基礎(chǔ)研究，探討巨噬細(xì)胞與疾病的關(guān)系和篩檢免疫增強(qiáng)藥物等情況下常用小鼠腹腔巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞功能的檢測方法如下：
（一）炭粒廓清試驗(yàn)
（二）吞噬功能檢測巨噬細(xì)胞對顆粒性抗原物質(zhì)具有很強(qiáng)的吞噬功能，常用雞紅細(xì)胞（CRBC）、白色念珠菌、酵母細(xì)胞等作為吞噬顆粒，用斑蝥敷貼法收集人巨噬細(xì)胞或從腹腔滲出液獲得鼠巨噬細(xì)胞。將巨噬細(xì)胞與雞紅細(xì)胞懸液在體外混合，溫育，涂片，染色，油鏡下觀察、計數(shù)，通過計算吞噬率和吞噬指數(shù)來反映巨噬細(xì)胞的吞噬功能，并通過觀察雞紅細(xì)胞的消化程度，判斷巨噬細(xì)胞消化功能。
（三）巨噬細(xì)胞溶酶體酶的測定
巨噬細(xì)胞富含溶酶體酶，如酸性磷酸酶、非特異性酯酶和溶菌酶等，測定這些酶的活性也是衡量巨噬細(xì)胞功能的指標(biāo)之一。
1.酸性磷酸酶的測定
2.非特異性酯酶的測定
（四）細(xì)胞毒作用測定
（五）巨噬細(xì)胞促凝血活性測定
