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凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn):單向擴(kuò)散試驗(yàn)

2020-06-15 14:39 來源:醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)
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凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn):單向擴(kuò)散試驗(yàn)是檢驗(yàn)職稱考試會(huì)涉及的內(nèi)容,為了幫助大家了解,醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)為大家整理如下:

單向擴(kuò)散試驗(yàn):瓊脂內(nèi)混入抗體,待測(cè)抗原從局部向瓊脂內(nèi)自由擴(kuò)散,如抗原和相應(yīng)抗體結(jié)合,則形成沉淀環(huán)。

1、試管法:將一定量的抗體混入0.7%瓊脂糖溶液中,注入小試管內(nèi),上層加抗原溶液使待測(cè)抗原在凝膠中自由擴(kuò)散,在抗原抗體比例恰當(dāng)位置形成沉淀環(huán)。

2、平板法:是將抗體或抗血清混入0.9%瓊脂糖內(nèi),未凝固前傾注成平板,然后在上打孔,將抗原加入孔中,放37℃讓其自由擴(kuò)散,24~48h后可見孔周圍出現(xiàn)沉淀環(huán),測(cè)定環(huán)的直徑或面積計(jì)算標(biāo)本中待測(cè)抗原的濃度。有兩種計(jì)算方法:l)Mancini曲線:適用大分子抗原的和長時(shí)間擴(kuò)散(>48h)的結(jié)果,沉淀環(huán)直徑的平方與抗原濃度呈線性關(guān)系c/d2=k.(其中c為抗原濃度d為沉淀環(huán)直徑k為常數(shù))

3、單向擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)時(shí)的注意點(diǎn):

(1)抗血清必須特異性強(qiáng)、效價(jià)高、親和力強(qiáng),在良好條件下保存。

(2)每次測(cè)定都必須作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

(3)每次測(cè)定時(shí)必須用質(zhì)控血清作質(zhì)控。

(4)注意雙環(huán)現(xiàn)象(出現(xiàn)了兩種抗原性相同成分)。

(5)應(yīng)用單克隆抗體測(cè)量多態(tài)性抗原時(shí),測(cè)定值偏低;用多克隆抗體測(cè)量單克隆病時(shí),測(cè)定值偏高。

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