離心技術(shù)種類及在檢驗中的應(yīng)用有哪些?
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離心技術(shù)在生化檢驗中的應(yīng)用主要有兩方面:
①對懸浮液中顆粒的分離,如從全血中分離血清、血漿等;
②分離兩種密度不同液相,如從有機溶劑和水的混合物中分離出有機相等。
1.普通離心法
可用來分離細胞、細胞膜或細胞碎片。
2.差速離心法(差級離心法)
其原理是交替使用低速或高速離心,也可采用逐漸增加離心速度的辦法,通過不斷增加相對離心力使一個非均勻混合液內(nèi)的大小、形狀不同的粒子分部沉淀。
適合分離大小和密度差異較大的顆粒。
由于分辨率不高,常用于定性分離手段之前的粗制品提取。
3.密度梯度離心法
該法具有很高的分辨率,可以同時使樣品中的各個組分得到分離。
做法:將樣品放在密度梯度介質(zhì)中進行離心。
常用的梯度材料有蔗糖、甘油、KBr、CsCl等。
此法可分為:速率區(qū)帶離心法;等密度區(qū)帶離心法。
(1)速率區(qū)帶離心法
根據(jù)分離的粒子在梯度液中沉降速度的不同,使具有不同沉降速度的粒子處于不同的密度梯度層內(nèi)分成一系列區(qū)帶,達到彼此分離的目的。
一般用于分離大小相異而密度相同的物質(zhì)。
(2)等密度區(qū)帶離心法
離心前預(yù)先配制介質(zhì)的密度梯度,待分離的樣品鋪在梯度液頂部或與梯度液混合,當梯度液由于離心力作用逐漸形成底濃而管頂稀的密度梯度,同時,原來分布均勻的粒子也發(fā)生重新分布。
此法常用于分離大小相似而密度差異較大的物質(zhì)。
4.分析性超速離心
主要是為了研究生物大分子的沉降特性和結(jié)構(gòu),如測定大分子的相對分子量、生物大分子的純度估計、分析生物大分子中的構(gòu)象變化等。
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