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公衛(wèi)醫(yī)師如何進行現(xiàn)場樣品采集保存

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公衛(wèi)執(zhí)業(yè)醫(yī)師經(jīng)常要做現(xiàn)場調(diào)查,在現(xiàn)場調(diào)查中,很重要的一項工作是現(xiàn)場樣品的采集、保存。正確采集、妥善保存、和盡快送檢樣品,以及隨后對樣品檢測結(jié)果進行正確的判讀和分析。

(一)樣品采集的目的、作用和原則

現(xiàn)場調(diào)查的目的主要可分為兩大類:一是查明突發(fā)公共衛(wèi)生事件或疾病暴發(fā)流行的原因,二是進行衛(wèi)生質(zhì)量監(jiān)測和評價。盡管根據(jù)調(diào)查目的、檢測對象和樣品種類不同,采樣具有其特殊性,但應(yīng)該遵循如下總原則:

1.注意生物安全:采樣中避免造成人員感染、標(biāo)本和環(huán)境的污染。采用防護裝備,注意安全操作和安全包裝樣品。需要采取的具體措施包括如下兩方面:

①個人防護:采樣時要戴手套,接觸不同患者時不能重復(fù)使用一副手套,以免交叉感染,并注意手套是否有小的破損;采樣中盡可能穿防護服,根據(jù)所估計的疫情級別,選擇不同的防護服;采樣后消毒要穿戴防護服和厚橡膠手套,對污染區(qū)表面和溢出物進行消毒;如懷疑有高度傳染力的病原,需使用護目鏡、呼吸面罩等;為了防止意外,確保安全,采樣應(yīng)備有急救包,供意外泄露時應(yīng)急使用。

②恰當(dāng)處理污染廢棄物:污染的可廢棄設(shè)備和材料應(yīng)先消毒后廢棄;用過的針頭妥善收集消毒,并按規(guī)定銷毀或損毀;在暴發(fā)疫點使用過的防護服、設(shè)備、材料等使用化學(xué)消毒劑消毒后再清洗,特殊情況也可在現(xiàn)場建簡易焚燒爐焚燒。

2.注意采樣的代表性或針對性:以衛(wèi)生質(zhì)量評價為目的的樣品采集,影響采樣代表性的因素包括采樣量、采樣部位、采樣時間、采樣的隨機性和均勻性,以及按批號抽樣。同時還應(yīng)考慮原料情況(來源、種類、地區(qū)、季節(jié)等)、加工方法、運輸、保藏條件、銷售中的各個環(huán)節(jié)(例如有無防蠅、防污染、防蟑螂及防鼠等設(shè)備)及銷售人員的責(zé)任心和衛(wèi)生認(rèn)識水平等對樣品可能的影響。以查明突發(fā)公共衛(wèi)生事件或疾病暴發(fā)流行的原因為目的的樣品采集,不要求樣品的代表性,強調(diào)針對性,盡可能采集病原微生物含量最多的部位和足夠檢測用的樣本;根據(jù)疾病表現(xiàn)和流行病學(xué)調(diào)查資料,指導(dǎo)采集正確的樣品。

3.注意采樣時間和種類:一般原則是根據(jù)不同疾病的特點和臨床表現(xiàn),確定采樣時間和標(biāo)本種類。以分離培養(yǎng)細(xì)菌為目的,則應(yīng)盡量在急性發(fā)病期和使用抗生素之前采集標(biāo)本,如果已使用抗生素,采樣和分離培養(yǎng)最好加入相應(yīng)的中和劑(中和樣品中殘存的抑菌物質(zhì))或進行其他處理,避免抗菌藥物對細(xì)菌培養(yǎng)的干擾。作病毒分離和病毒抗原檢測的標(biāo)本,應(yīng)在發(fā)病初期和急性期采樣,最好在發(fā)病1~2天內(nèi)采取,此時病毒在體內(nèi)大量繁殖,檢出率高。

4.注意避免采樣引入新的污染或者對微生物的殺滅因子:所有采樣用具、容器需嚴(yán)格滅菌,并以無菌操作采樣。對容器基本要求是選耐用材料制成,容器包裝好后可防滲漏,能承受空中或地面運送過程中可能發(fā)生的溫度和壓力變化。對微生物樣品,應(yīng)避免采樣時對微生物的殺滅作用和引入新的抑菌物質(zhì),如容器是否有消毒劑的殘留,或使用剛燒灼未冷卻的采樣工具。并注意保護目的微生物,注意使用正確的采樣液和加入中和劑。

5.注意對樣品的詳細(xì)標(biāo)記:用于衛(wèi)生質(zhì)量評價的樣品,應(yīng)標(biāo)明樣品名稱、編號、采樣時間、采樣量、采樣者、檢測項目等。

(二)樣品采集的方法和注意事項

1.用于微生物分離培養(yǎng)或抗原檢測的生物性樣品:主要用于查明突發(fā)公共衛(wèi)生事件或疾病暴發(fā)流行的原因。

(1)咽拭子、洗漱液或痰液標(biāo)本:①咽拭子的采集:讓患者仰頭張口,用壓舌板壓舌,用無菌棉拭子在咽部涂抹數(shù)次后,放入含2mlHank液的試管中,棉拭子接觸手的部分應(yīng)及時折斷或剪斷去掉,然后蓋緊試管。②洗漱液的采集:用生理鹽水或自配淡鹽水約15ml作為洗漱液,讓患者咳嗽后,倒入滅菌生理鹽水或自配淡鹽水約15ml,反復(fù)洗漱咽部1分鐘,直接將洗漱液吐入滅菌容器內(nèi)。③痰液標(biāo)本:肺部感染應(yīng)采取痰標(biāo)本,以清晨第一口痰為最佳。采取標(biāo)本的時間一般在發(fā)病的第一日采集,最遲不得超過3日,最好選擇體溫在38℃以上時采集。

(2)糞便標(biāo)本:對黏液膿血便應(yīng)挑取黏液或膿血部分,液狀糞便采集水樣便或含絮狀物的液狀糞便2~5ml;成形糞便至少取蠶豆大小糞便1塊(約5g)放于滅菌容器內(nèi),最好加有保存液或增菌液。若無法獲得糞便時,可用保存液或增菌液濕潤過的棉拭子插入肛門4~5cm深處(小兒2~3cm)輕輕轉(zhuǎn)動一圈,取直腸表面的黏液后取出,盛入運送培養(yǎng)基或保存液中送檢,為保證多個檢驗項目的開展,同一患者應(yīng)至少采集2支肛拭。采樣時注意勿將尿液或水混入糞便或容器內(nèi),采樣后盡快塞緊或旋緊容器,所采取的糞便標(biāo)本應(yīng)盡快送檢,運送時間不得超過2小時,否則應(yīng)保存在4~8℃條件下送檢;集體腹瀉或食源性疾病暴發(fā)患者糞便采集,應(yīng)根據(jù)患者人數(shù)決定采取標(biāo)本的數(shù)量;盡量在急性腹瀉期及用藥前采集。

(3)血液標(biāo)本:作血液病原培養(yǎng)時,嚴(yán)格無菌采靜脈血,一般成人采血10~15ml,兒童2~5ml,嬰兒0.5~2ml,放入無菌的加入抗凝劑的有螺口容器或培養(yǎng)瓶中送檢。作血片、暗視野檢查可采耳垂血或指尖血。

(4)尿液標(biāo)本:主要采用中段尿采集法,先用肥皂水清洗外陰部,再以無菌水洗凈,一般取首次晨尿的中段尿10~20ml于無菌容器內(nèi)。結(jié)核分枝桿菌集菌檢查時,以一清潔容器留取24小時尿,取沉渣10~15ml送檢。注意無菌操作并在用藥前采集,最好在2~3小時內(nèi)送到實驗室檢測,否則應(yīng)在4~8℃條件下保存運送樣品。

(5)腦脊液:在無菌條件下由腰椎穿刺抽取3~5ml,放于無菌試管或厭氧瓶內(nèi)(需厭氧培養(yǎng)時)。用于細(xì)菌培養(yǎng)時標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢;用于病毒培養(yǎng)時在4~8℃最多可維持48小時,否則需在-70℃保存;本操作最好在醫(yī)院內(nèi)由有經(jīng)驗的醫(yī)生按腰椎穿刺術(shù)進行。

(6)皮膚標(biāo)本:有時需要采集皮疹或皮膚病變標(biāo)本幫助診斷。如懷疑皮膚炭疽或淋巴腺鼠疫時可從病變皮膚(焦痂和腹股溝淋巴結(jié))取樣做細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)。出現(xiàn)囊皰疹或膿皰疹時可直接從囊皰或膿皰采集液體用于鏡檢或培養(yǎng)。采集皰疹標(biāo)本時要注意無菌操作,刺破皰囊后用無菌拭子盡量拭抹足夠量的皰疹內(nèi)液體。

(7)尸體標(biāo)本:進行解剖和取樣。解剖前觀察并記錄外觀狀態(tài),如新鮮程度、皮膚粘膜、淋巴結(jié)、尸僵程度和自然孔有無血性滲出物等。剖開后應(yīng)觀察皮下有無出血,膠樣水腫,淋巴結(jié)、肝、脾是否大和有無其他病變,肺部有無充血,肝樣實變、化膿和結(jié)節(jié)性病灶等。如需要采血則需進行心臟穿刺。采腦組織樣本時,如不開顱,可用穿刺長針由鼻孔插入,一直刺到腦干和間腦部位吸出腦組織少許。剖檢森林腦炎尸體時,可采取丘腦和小腦部分,其他型別腦炎可采海馬回部位的腦組織塊。如取臟器組織,先用灼熱的金屬壓舌板接觸一下采樣部位醫(yī)`學(xué)教育網(wǎng)整理,瞬時烙焦表面,清除雜菌,用剪刀剪取深部組織塊。供分離病毒的組織要在死后5小時內(nèi)取樣。尸體如已腐爛,可鋸一段帶骨髓的股骨送檢。至少取1~2g感染部位標(biāo)本,放入單獨的裝有相應(yīng)液體或培養(yǎng)基的無菌容器中(注意貼牢標(biāo)簽和擰緊螺口),這些液體如:用于組織病理學(xué)切片的固定液,用于制備免疫熒光顯微技術(shù)所需的冷凍切片的無菌鹽溶液,用于分離細(xì)菌或病毒所需的各種轉(zhuǎn)運培養(yǎng)基。裝樣本的容器封口后,表面用碘酒涂擦消毒后送檢。為了避免尸體和解剖時的污染物成為傳染源,解剖后尸體最好火化;不能火化則應(yīng)離村莊和交通要道1Km以外,深挖2m以上土坑,坑內(nèi)和尸體周圍撒生石灰。先填入可能被污染的土,后用凈土填平;所用器材和隔離衣,凡耐熱者均煮沸消毒40分鐘,橡膠和塑料制品用1%~5%含氯消毒劑浸泡6小時以上。先填入可能被污染的土,后用凈土填平;所用器材和隔離衣,凡耐熱者均煮沸消毒40分鐘,橡膠和塑料制品用1%~5%含氯消毒劑浸泡6小時以上。

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