一、標(biāo)本的采集
(一)患者標(biāo)本的采集。
急性期血清:發(fā)病1周內(nèi),無菌靜脈采集非抗凝血5ml.
恢復(fù)期血清:發(fā)病后2至 3周或以上,無菌靜脈采集非抗凝血5ml.
(二)伊蚊標(biāo)本的采集。
在本病暴發(fā)或流行期間,采集疫點(diǎn)的伊蚊成蚊和幼蟲,用于病原學(xué)檢測(cè)。
二、標(biāo)本的保存與運(yùn)輸
血液標(biāo)本采集后,在4℃條件下盡快運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行血清分離并保存。
血清標(biāo)本可置于-20℃冰箱短期保存,長期保存須置-70℃以下。
標(biāo)本運(yùn)輸按照衛(wèi)生部《人間傳染的病原微生物名錄》的規(guī)定執(zhí)行。
三、檢測(cè)方法
常用檢測(cè)方法主要有3種:血清學(xué)檢測(cè)、核酸檢測(cè)和病毒分離。一般情況下,病毒分離與核酸檢測(cè)宜采用發(fā)病后1周內(nèi)的血清; IgM抗體檢測(cè)宜采用發(fā)病4天后的血清,IgG抗體的檢測(cè)宜采用發(fā)病1周后的血清。
(一)血清學(xué)檢測(cè)方法。
1.特異性IgM檢測(cè)。
采用的方法有:捕獲ELISA法(MacELISA)、間接ELISA法、免疫熒光法和免疫層析法等。
2.特異性IgG檢測(cè)。
采用的方法有:間接ELISA法、免疫熒光法和免疫層析法等。
3.意義
(1)IgM陽性結(jié)果,表明患者新近CHIKV感染,用于基孔肯雅熱早期診斷。
(2)IgG陽性結(jié)果,表明曾受到CHIKV感染;恢復(fù)期血清抗體滴度比急性期抗體滴度有4倍或4倍以上升高則可確診。
(二)病原學(xué)檢測(cè)方法。
1.基孔肯雅病毒核酸檢測(cè)。
一般發(fā)病后7日內(nèi)在多數(shù)患者的血清中可檢測(cè)到病毒核酸。凍存伊蚊標(biāo)本也可進(jìn)行基孔肯雅病毒核酸檢測(cè)醫(yī)學(xué)教育`網(wǎng)整理??刹捎肦T-PCR和Real-time RT-PCR等核酸擴(kuò)增的方法檢測(cè)。
2. 病毒分離鑒定。
常用Vero、C6/36等敏感細(xì)胞系開展病毒分離,分離物可以免疫熒光法或核酸檢測(cè)進(jìn)行鑒定。
3.意義。
患者血清中分離到基孔肯雅熱病毒和/或檢測(cè)到病毒核酸后,可確診基孔肯雅熱病毒感染。