細菌染色標本在普通光學顯微鏡下可以觀察細菌的形態(tài)、大小、排列、染色性、特殊結(jié)構(gòu)（芽胞、莢膜、鞭毛）、異染顆粒等。

　　因為在接近中性的環(huán)境中細菌都帶有負電荷，易與帶正電荷的堿性染料結(jié)合，故常用堿性苯胺染料如美藍、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等染色細菌。

　　細菌標本經(jīng)染色后，除能清楚看到細菌的形態(tài)、大小、排列方式外，還可根據(jù)染色反應(yīng)將細菌進行分類，因此染色標本的檢查在細菌的鑒定中應(yīng)用最廣，具有非常重要的作用。

　　細菌染色的基本程序：涂片（干燥）→固定→染色（媒染）→（脫色）→（復(fù)染）。

　　（一）常用染料

　　用于細菌染色的染料，多為人工合成的含苯環(huán)的有機化合物，在其苯環(huán)上帶有色基與助色基。帶有色基的苯環(huán)化合物一色原，雖然本身帶色，但與被染物無親和力而不能使之著色，助色基并不顯色，但它本身能解離，解離后的染料可以與被染物結(jié)合生成鹽類，使之著色。根據(jù)助色基解離后的帶電情況，可將染料分為堿性和酸性兩大類。此外，還有復(fù)合染料醫(yī)學教|育網(wǎng)搜集整理。

　　1.堿性染料：電離后顯色離子帶正電荷，易與帶負電荷的被染物結(jié)合。由于細菌的等電點在pH2～5之間，在堿性、中性、弱酸性的環(huán)境中細菌均帶負電荷，易與帶正電荷的染料結(jié)合而著色。常用的染料有堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫、美藍等。

　　2.酸性染料：電離后顯色離子帶負電荷，易與帶正電荷的被染物結(jié)合。一般情況下細菌都帶有負電荷故不易著色。如果降低菌液的pH使細菌帶正電荷，則可被染色。酸性染料通常用來染細胞漿，而很少用于細菌的染色。常用的酸性染料有伊紅、剛果紅等。

　　3.復(fù)合染料（中性染料）及熒光染料：復(fù)合染料是堿性染料和酸性染料的復(fù)合物，如瑞氏染料（伊紅美藍）、姬姆薩染料（伊紅天青）等；熒光染料如熒光標記的抗體，熒光素常用異硫氫基熒光素。這些染色常用于某些特殊的染色技術(shù)中。

　　（二）常用的染色方法

　　在細菌感染標本的檢查中，臨床上常用的染色方法有革蘭染色、抗酸染色和熒光染色。

　　1.單染色法：用一種染料將細菌和周圍物體染成同一種顏色，稱為單染色法。如呂氏美藍或稀釋復(fù)紅染色法。細菌經(jīng)單染色法處理后，可觀察其形態(tài)、排列、大小及簡單的結(jié)構(gòu)，但不能顯示各種細菌染色性的差異。

　　2.復(fù)染色法：用兩種或兩種以上的染料染色的方法，稱為復(fù)染色法或鑒別染色法。常用的有革蘭染色法和抗酸染色法。

　?。?）革蘭染色：本法是細菌學中最經(jīng)典、最常用的染色方法。除糞便、血液等極少數(shù)標本外，絕大多數(shù)標本在分離培養(yǎng)之前都要進行革蘭染色、鏡檢。通過革蘭染色將所有細菌分為G⁺菌和G^-菌兩大類，可初步識別細菌，縮小范圍，有助于進一步鑒定。甚至有時結(jié)合細菌特殊形態(tài)結(jié)構(gòu)及排列方式，對病原菌可進行初步鑒定，如腦脊髓膜炎患者，取其腦脊液涂片、革蘭染色、鏡檢，如檢到革蘭陰性、腎形、凹面相對的雙球菌，位于細胞內(nèi)或細胞外，可報告“找到革蘭陰性雙球菌，形似腦膜炎奈瑟菌”；如檢到革蘭陽性、菌體周圍有明顯莢膜的雙球菌，可報告“找到革蘭陽性雙球菌，形似肺炎鏈球菌”。其結(jié)果為臨床早期診斷及治療提供了依據(jù)醫(yī)學教|育網(wǎng)搜集整理。

　　革蘭染色除用以鑒定細菌外，病原菌革蘭染色特性可為臨床選擇用藥提供參考，幫助臨床制訂有針對性的治療方案。因為G⁺菌與G^-菌對一些抗生素表現(xiàn)出不同的敏感性，且其致病物質(zhì)（前者產(chǎn)生外毒素而后者多產(chǎn)生內(nèi)毒素）及其作用機理不同。

　?。?）抗酸染色：抗酸染色也可將細菌分為兩大類：即抗酸性細菌和非抗酸性細菌。因為臨床上絕大多數(shù)病原菌為非抗酸性細菌，所以抗酸染色不作為臨床上常規(guī)的細菌檢查項目，只針對性用于結(jié)核病、麻風病等的細菌檢查。疑似結(jié)核分枝桿菌感染的標本，經(jīng)抗酸染色后以油鏡檢查，即可作出初步鑒定。將有肺結(jié)核癥狀病人的痰標本，制成涂片后，作萋-納染色鏡檢，根據(jù)所見結(jié)果即可報告“找到（未找到）抗酸菌”.再如有腎感染癥狀的病人，取其尿標本，經(jīng)離心沉淀后作涂片，行萋-納及潘本漢抗酸染色，如兩張涂片均查見紅色抗酸桿菌，可報告為“找到抗酸分枝桿菌”。對臨床疾病的診斷和治療具有重要參考價值。

　　3.熒光染色：熒光染色法敏感性強，效率高而且容易觀察結(jié)果，在臨床細菌鑒定中有很大的實用價值。主要用于結(jié)核分枝桿菌、麻風分枝桿菌、白喉棒狀桿菌及痢疾志賀菌等的檢測。如痰標本涂片、固定，用熒光染料金胺0法（也稱金胺O-羅丹明B法）染色，以熒光顯微鏡檢查，在暗背景中可觀察到呈金黃色熒光的菌球。

　　除以上所述染色方法外，用于細菌鑒定的還有鞭毛染色、異染顆粒染色等。鞭毛染色后于顯微鏡下可觀察到菌體上有無鞭毛、鞭毛的位置及數(shù)量，在細菌鑒定中，特別是非發(fā)酵菌的鑒定中很重要。疑為白喉棒狀桿菌感染，進行涂片檢查，除證實為革蘭陽性典型棒狀桿菌外，還須用異染顆粒染色法，鏡檢異染顆粒，方可初步報告“檢出形似白喉棒狀桿菌”，為臨床早期診斷提供依據(jù)。