免疫球蛋白的分離提純

Δ 目的

有利標(biāo)記；減少非特異反應(yīng)；有利Ig定量

Δ 分離提純方法（原理）：一般選用2~3種，或同一方法反復(fù)進(jìn)行2~3次

鹽析法：在不同濃度的中性鹽中蛋白質(zhì)會(huì)脫水，降低帶電電勢(shì)，親水性變?yōu)槭杷?，分子間相互凝聚而沉淀（鹽析作用）。不同蛋白質(zhì)鹽析所需中性鹽的濃度不同，故可分離不同蛋白質(zhì)。常用中性鹽：硫酸銨分析純?cè)噭?/p>

離子交換層析法：利用不同的蛋白質(zhì)在緩沖溶液中所帶電荷不同，與某一載體上的具有相反電荷的離子基團(tuán)進(jìn)行吸附，然后進(jìn)行解脫，達(dá)到純化蛋白質(zhì)目的。常用載體：纖維素DEAE，帶正電，吸附帶負(fù)電的Alb、α、β球蛋白

凝膠過(guò)濾法：凝膠顆粒是網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，當(dāng)分子大小不同的混合物通過(guò)凝膠柱時(shí)，分子大的先下來(lái)，分子小的嵌入凝膠顆粒的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中后下來(lái)，從而將分子大小不同的物質(zhì)分離開(kāi)來(lái)，即為分子篩的作用。常用凝膠：葡聚糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、瓊脂糖凝膠，分離Ig多用G150

親和層析法：利用抗原抗體的結(jié)合具有特異性、可逆性，將純化抗原先交聯(lián)到載體（瓊脂糖珠）上，制成親和層析柱，當(dāng)Ab（Ig）通過(guò)時(shí)，與抗原特異性結(jié)合在柱上，Ab中雜質(zhì)流出。然后通過(guò)改變緩沖液 pH、離子強(qiáng)度，使Ab解脫下來(lái)。