紅色漸變?yōu)樽仙?/span>。在同樣條件下，甾體皂苷加熱至60 ℃顯色，三萜皂苷必須加熱至100℃才能顯色，也生成紅色漸變?yōu)樽仙?，可用于紙層析?/p>4三氯甲烷-濃硫酸反應(yīng)：
樣品溶于三氯甲烷后加入濃硫酸，在三氯甲烷層呈現(xiàn)紅色或藍(lán)色，硫酸層有綠色的熒光。
5五氯化銻反應(yīng)：
將皂苷樣品溶于三氯甲烷或醇后，點(diǎn)于濾紙上，噴以20%五氯化銻的三氯甲烷溶液（不應(yīng)含乙醇和水），干燥后60～70℃加熱，顯藍(lán)色、灰藍(lán)色或灰紫色斑點(diǎn)。
6芳香醛-硫酸或高氯酸反應(yīng)：
在使用芳香醛為顯色劑的反應(yīng)中，以香草醛最為普遍，其顯色靈敏，常作為甾體皂苷的顯色劑。除香草醛外，尚可應(yīng)用的還有對(duì)-二甲氨基苯甲醛。
（三）皂苷的提取分離與結(jié)構(gòu)鑒定
1.皂苷的提取分離
（1）皂苷及其苷元的常用提取方法
一、皂苷的提取
1甲醇或乙醇提取-正丁醇萃取法（提取通法）：
一般常用不同濃度的乙醇或甲醇作溶劑提取皂苷。醇提取物混懸于水中，先用石油醚、乙醚等親脂性有機(jī)溶劑萃取，除去親脂性雜質(zhì)，然后再用水飽和的正丁醇萃取，得到總皂苷。
2甲醇或乙醇提取-丙酮或乙醚沉淀法：
醇提取液適當(dāng)濃縮后，加入適量的丙酮或乙醚，則皂苷可能被沉淀析出。
3堿水提取法：
一些酸性皂苷，可依其難溶于水，易溶于堿水的性質(zhì)，先用堿水提取，再加酸酸化使皂苷沉淀析出。
二、皂苷元的提取
1一般采用加酸加熱將粗皂苷水解，再用與水不相混溶的弱極性有機(jī)溶劑，如苯、氯仿等從水解液中將皂苷元提取出來，或者直接用酸水加熱水解中藥原料中的皂苷，濾除不溶物，水洗，干燥，再用有機(jī)溶劑提取皂苷元。
2在加酸加熱水解提取皂苷元時(shí)，應(yīng)注意在劇烈條件下苷元結(jié)構(gòu)發(fā)生脫水、環(huán)合、雙鍵位移等變化。
3分離含有羰基的甾體皂苷元，常用吉拉爾T或吉拉爾P試劑。
（2）利用吸附色譜法和分配色譜法分離、純化皂苷
1吸附色譜法
常用的吸附劑是硅膠、氧化鋁和反相硅膠，洗脫劑一般采用混合溶劑。
2分配色譜法
一般用低活性的氧化鋁或硅膠作吸附劑，用不同比例的氯仿-甲醇-水或其他極性較大的有機(jī)溶劑進(jìn)行梯度洗脫。
（3）利用高效液相色譜法分離皂苷
高效液相色譜法
高效液相色譜法是目前分離皂苷類化合物最常用的方法，其分離效能較高。用于皂苷的分離制備一般采用反相色譜柱，以甲醇-水、乙腈-水等系統(tǒng)為洗脫劑。
2.皂苷的結(jié)構(gòu)測(cè)定
（1）MS、13C-NMR譜在三萜皂苷結(jié)構(gòu)測(cè)定中的應(yīng)用
1質(zhì)譜（MS）
1）甾體皂苷：甾體皂苷元的質(zhì)譜中均出現(xiàn)一個(gè)很強(qiáng)的m/z139的基峰和中等強(qiáng)度的m/z115碎片峰以及一個(gè)很弱的m/z126的輔助離子峰。
2）三萜皂苷：對(duì)于具有△12的三萜皂苷，分子中因具有環(huán)乙烯結(jié)構(gòu)，容易發(fā)生RDA裂解，根據(jù)生成的碎片離子峰可以確定A、B環(huán)及D、E環(huán)上的取代基性質(zhì)、數(shù)目和位置等。
2NMR譜
1）螺甾烷醇類皂苷元的C-22信號(hào)大多數(shù)情況下出現(xiàn)在δ109.5±0.1處，這是一個(gè)特征標(biāo)志。
2）五環(huán)三萜齊墩果烷型（β-香樹脂醇型）13C-NMR譜中有6個(gè)季碳信號(hào)，烏索烷型（α-香樹脂醇型）13C-NMR譜中有5個(gè)季碳信號(hào)。羽扇豆烷型13C-NMR譜中有異丙基信號(hào)。
（2）甾體皂苷元的IR光譜特征
1C-25的立體異構(gòu)的區(qū)別
1）25D甾體皂苷有860cm-1、900cm-1、920cm-1及980cm-1四條譜帶，其中900cm-1處的吸收較920cm-1處的強(qiáng)2倍，
2）25L甾體皂苷在860cm-1、900cm-1、920cm-1及980cm-1處也有吸收，其中920cm-1處的吸收較900cm-1處強(qiáng)3～4倍。
2羰基C-11或C-12位是否形成共軛體系：
1）甾體皂苷元的C-11或C-12位有羰基（非共軛體系）：則只在1705～1715 cm-1處有一個(gè)吸收峰，且C-11位羰基比C-12位羰基頻率稍高。
2）C-12位羰基成α，β-不飽和酮的體系（有雙鍵成共軛體系）：則在1600～1605 cm-1（雙鍵）及1673～1679 cm-1（羰基）處各有一個(gè)吸收峰。
3）有雙鍵的甾體皂苷：在1580～1680 cm-1有紅外吸收，在3070～3085 cm-1和680～980cm-1處可見較弱的吸收峰。
（四）實(shí)例：含皂苷的常用中藥
1.人參
1化學(xué)成分：人參含有皂苷、多糖和揮發(fā)油等多種化學(xué)成分，人參皂苷為人參的主要有效成分之一。
2《中國(guó)藥典》：以人參皂苷為指標(biāo)成分對(duì)人參、西洋參、紅參、人參葉和三七進(jìn)行定性鑒定和含量測(cè)定。
1）人參、西洋參和紅參的質(zhì)量控制成分：人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb；
2）人參葉的質(zhì)量控制成分：人參皂苷Rg1和人參皂苷Re；
3）三七的質(zhì)量控制成分：人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1；
3結(jié)構(gòu)與分類
人參皂苷可以分為三類：
1）人參二醇型——A型：屬于達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷，6位碳無(wú)羥基取代，其皂苷元為20（S）-原人參二醇，如人參皂苷Rb1、Rc、Rd、等。
2）人參三醇型——B型：屬于達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷，6位碳有羥基取代，其皂苷元為20（s）-原人參三醇，如人參皂苷Re、Rf、Rg1等。
3）齊墩果酸型——C型：屬于齊墩果烷型五環(huán)三萜衍生物，.其皂苷元是齊墩果酸，如人參皂苷Ro
4人參皂苷的提取與分離
1）人參皂苷單體成分的分離一般采用硅膠色譜法，常以三氯甲烷-甲醇-水（65：35：10下層）和正丁醇-乙酸乙酯-水（4：1：5上層）等作為洗脫系統(tǒng).
2）如果用7%HCl的稀乙醇溶液處理人參總皂苷，其酸水解產(chǎn)物進(jìn)行硅膠色譜，則可以得到人參二醇、人參三醇和齊墩果酸。
5在臨床應(yīng)用中應(yīng)注意的問題：長(zhǎng)期大量服用，可引起興奮、失眠、心悸、口干燥生瘡。服用200ml可出現(xiàn)中毒現(xiàn)象：玫瑰疹、眩暈、出血等。
2.甘草
1主要成分：三萜皂苷以甘草皂苷含量最高。甘草皂苷又稱甘草酸，為甘草中的甜味成分。
2《中國(guó)藥典》：將甘草和炙甘草的質(zhì)量控制成分定為甘草皂苷（甘草酸），對(duì)照品采用甘草酸銨，同時(shí)將甘草苷也列入質(zhì)量控制成分之一，對(duì)照品采用甘草苷。
3性狀：
1）無(wú)色柱狀結(jié)晶，mp 220℃（分解）， +46.2°。
2）甘草皂苷易溶于稀熱乙醇，幾乎不溶于無(wú)水乙醇或乙醚，但極易溶于稀氨水中，通常利用該性質(zhì)提取甘草皂苷。甘草皂苷水溶液有微弱的起泡性和溶血性；甘草皂苷可以形成鉀鹽或鈣鹽形式，并存在于甘草中；甘草皂苷與5%的稀硫酸在加壓、110～120℃條件下水解，可生成一分子的甘草皂苷元（甘草次酸）和兩分子的葡萄糖醛酸
4生物活性：甘草皂苷和甘草次酸都具有促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）樣的生物活性，臨**作為抗炎藥使用，并用于治療胃潰瘍，但只有18-βH的甘草次酸才具有ACTH樣的作用，18-αH型則沒有此種生物活性。
5提取方法
1）甘草酸銨鹽制備?。河捎诟什菟嵩碥辗肿又泻然?，可以使用堿溶酸沉法進(jìn)行提取與分離。
2）甘草酸單鉀鹽的制備： 甘草酸不易精制，一般需制成鉀鹽才能進(jìn)一步精制成純品。
3）甘草次酸的制備： 甘草次酸可以通過將甘草酸單鉀鹽進(jìn)行部分水解制取，得到的甘草次酸粗品經(jīng)乙醇重結(jié)晶得到甘草次酸晶體。
6甘草在臨床應(yīng)用中應(yīng)注意的問題：甘草毒性甚低，有潴鈉排鉀作用，長(zhǎng)期服用，能引起水腫和血壓升高，過量服用可發(fā)生浮腫、氣喘、頭痛，伴以高血壓、肺水腫，對(duì)老年患者可引發(fā)心臟性氣喘等；甘草次酸可抑制豚鼠甲狀腺功能，有降低基礎(chǔ)代謝的趨勢(shì)。臨床應(yīng)用應(yīng)注意。
3黃芪
1主要成分：在膜莢黃芪中有乙酰黃芪苷Ⅰ、黃芪苷Ⅰ-Ⅷ，異黃芪苷Ⅰ、Ⅱ，黃芪皂苷甲、乙、丙，環(huán)黃芪醇和大豆皂苷Ⅰ；
蒙古黃芪中有黃芪苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和大豆皂苷Ⅰ。
2《中國(guó)藥典》：以黃芪甲苷為黃芪和炙黃芪的質(zhì)量控制成分之一，同時(shí)將另一主要成分毛蕊異黃酮葡萄糖苷也作為兩種藥材質(zhì)量控制成分，以保障藥材的質(zhì)量。
:2結(jié)構(gòu)：四環(huán)三萜及五環(huán)三萜苷類。
3性狀：黃芪苷Ⅳ（astragalosideⅣ）：又名黃芪甲苷。分子式C41H68 014，分子量784，mp295～296℃。
4生物活性：黃芪皂苷具有多種生物活性，其中黃芪甲苷是黃芪中主要生理活性成分，具有抗炎、降壓、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜作用，并能促進(jìn)再生肝臟DNA合成和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力的功能。
5提取與分離：
黃芪中黃芪皂苷的提取分離，可利用黃芪根粉，經(jīng)石油醚回流提取，硅膠柱色譜分離，石油醚-丙酮洗脫制得。
5臨床應(yīng)用中應(yīng)注意的問題：黃芪臨**主要用于心悸、黃疸等癥，有報(bào)道黃芪注射液致過敏性休克、發(fā)熱，引起藥物疹等，過敏體質(zhì)者應(yīng)慎用，臨床應(yīng)用上應(yīng)注意。
4.柴胡
1主要成分：從干燥根中提取得柴胡總皂苷（約1.6%～3.8%），已證明具有解熱抗炎、抗肝損傷、抗輻射損傷、抗菌等作用，是柴胡的主要有效成分。柴胡貯藏時(shí)需置通風(fēng)干燥處，防霉，防蛀。
2《中國(guó)藥典》指標(biāo)性成分：柴胡皂苷a和柴胡皂苷d，兩者的總含量大于等于0.30%。
3結(jié)構(gòu)分類：三萜皂苷。柴胡皂苷元為齊墩果烷衍生物。
1）Ⅰ型的皂苷，其結(jié)構(gòu)中具有13β、28-環(huán)氧醚鍵，是柴胡中的原生苷，如柴胡皂苷a、c、d、e等；
2）Ⅱ型柴胡皂苷為異環(huán)雙烯類，如柴胡皂苷b1、b2等，為柴胡皂苷大多為次生苷；
3）Ⅲ型為△12齊墩果烷衍生物，并且大多在C-11位有及—0CH3取代，柴胡皂苷大多為為次生苷，是因?yàn)樵谔崛∵^程中植物體內(nèi)所含酸性成分的影響，使Ⅰ型皂苷結(jié)構(gòu)中的環(huán)氧醚鍵開裂而產(chǎn)生的，如柴胡皂苷b3、b4等。
4）Ⅳ型具有同環(huán)雙烯結(jié)構(gòu)，也被認(rèn)為是原生苷的環(huán)氧醚鍵開裂，同時(shí)發(fā)生雙鍵轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生的，如柴胡皂苷g。
5）Ⅴ型為齊墩果酸衍生物。
6）Ⅳ、Ⅴ型數(shù)量較少。
4在臨床應(yīng)用中應(yīng)注意的問題：柴胡具有解熱、抗炎、抗病毒、抗驚厥、抗癲癇、保肝功效，在臨**主要用于治療感冒和瘧疾；柴胡注射液的不良反應(yīng)有過敏反應(yīng)、過敏性休克及急性肺水腫等，臨床應(yīng)用時(shí)應(yīng)注意。
5知母
1主要成分：知母中的化學(xué)成分主要為甾體皂苷和芒果苷，還含有木脂素、甾醇、鞣質(zhì)、膽堿等成分。
2《中國(guó)藥典》上將知母皂苷BⅡ和芒果苷定為知母藥材的質(zhì)量控制成分，要求知母皂苷BⅡ含量大于等于3.O%，芒果苷的含量大于等于0.7%。
3結(jié)構(gòu)類型：知母根莖中含皂苷約6%，其類型分別為螺甾烷醇類（如知母皂苷AⅢ和BⅠ等）和呋甾烷醇類（如知母皂苷BⅤ等）。其中知母皂苷AⅢ含量最高。
