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工具酶作為試劑用于測(cè)定化合物濃度或酶活力的酶稱為工具酶。
1.NAD(P)+或NAD(P)
H偶聯(lián)的脫氫酶及其指示反應(yīng)最常作為工具酶的脫氫酶是乳酸脫氫酶(LD)、蘋果酸脫氫酶(MD)、谷氨酸脫氫酶(GLD)和6-磷酸葡萄糖脫氫酶(C-6-PD)。前兩種酶主要以NAD+或NAD為輔酶,GLD可以NAD+或NAD(P)+或其還原型為輔酶。NADH和NAD(P)H在340nm有特征性光吸收,可借此用分光光度計(jì)檢測(cè),還可通過熒光法及化學(xué)發(fā)光法測(cè)定。
2.偶聯(lián)H202的工具酶及其指示反應(yīng)
葡萄糖氧化酶、尿酸酶、甘油氧化酶、膽固醇氧化酶等工具酶分別用于葡萄糖、尿酸、甘油、膽固醇的測(cè)定,可使相應(yīng)底物被氧化,生成H202,H2 02可通過下列指示反應(yīng)來(lái)檢測(cè)。
(1)使單一的色素原顯色:色素原是一種無(wú)色的色素前身,在過氧化物酶(POD)存在下被H202氧化后可生成有色的色素。如鄰聯(lián)茴香胺(ODA)醫(yī)學(xué)教育`網(wǎng)搜集整理。
(2)使成對(duì)的色素原顯色:必須有兩個(gè)色素原共同存在,再在過氧化物酶(POD)的催化下生成色素。如酚和4-氨基安替比林作用,生成紅色色素。
(3)發(fā)光反應(yīng):H2O2也可用化學(xué)發(fā)光反應(yīng)來(lái)監(jiān)測(cè)。
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