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本方法耗時(shí)較長(zhǎng),約需14天才能出結(jié)果。用本方法診斷瘋牛病時(shí)必須有較高的專(zhuān)業(yè)水平和豐富的神經(jīng)病理學(xué)觀察經(jīng)驗(yàn)。在組織切片效果較好時(shí),確診率可達(dá)90%.
瘋牛病組織病理學(xué)檢測(cè)方法的主要步驟如下。
?。?)樣品準(zhǔn)備病牛宰殺后,要盡快用特制采樣勺用電鋸或砍刀將牛的顱腔打開(kāi)取出腦干。腐爛的牛腦不能用于組織病理學(xué)檢查。將取出的腦組織立即投入到新鮮配制的10%福爾馬林溶液中固定1周,固定完后在腦閂部、前丘部、小腦后腳部橫切一塊3~4mm厚的組織塊,用新鮮配制的固定液中再固定3天。
?。?)脫甲醛將固定好的組織塊放人流水中漂洗24h.
?。?)脫水依次用75%酒精、85%酒精、95%酒精和100%酒精浸泡處理組織塊,使其水分充分脫去。
?。?)透明脫完水的組織塊用二甲苯浸泡透明。
?。?)浸蠟與包埋透明好的組織塊立即投入到軟蠟和硬蠟中處理,充分浸透石蠟,然后用硬蠟包埋組織塊。
?。?)切片將包埋好的組織塊切成5/lm厚的切片,用貼附有黏片劑的載玻片貼片,并放人干燥箱中烘烤玻片,使組織切片貼附更緊,實(shí)驗(yàn)肘才不容易掉片。
?。?)H.E染色在二甲苯、不同濃度的酒精處理切片后,用哈里斯酸性蘇木精和伊紅處理切片,然后再用不同濃度的酒精和二甲苯處理切片,最后用中性樹(shù)膠封片。
?。?)光學(xué)顯微鏡觀察在光學(xué)顯微鏡下(10X10、10X20、10X40)觀察切片,被檢樣品腦干灰質(zhì)區(qū)特別是腦閂部位的孤束核、迷走神經(jīng)背核、三叉神經(jīng)脊束核、紅接和動(dòng)跟神經(jīng)核等處的神經(jīng)元核周體或神經(jīng)纖維網(wǎng)胞漿中出現(xiàn)雙側(cè)對(duì)稱(chēng)性海綿狀空泡病變,且空袍呈現(xiàn)則的圓形或橢圓形,周邊整齊,則可判定為BSE陽(yáng)性。醫(yī)學(xué)教.育網(wǎng)搜集整理在正常情況下,動(dòng)眼神經(jīng)核稿紅核處的核周體也可能有少量空泡出現(xiàn),但不呈雙側(cè)對(duì)稱(chēng),應(yīng)注意區(qū)別。
若在腦干灰質(zhì)區(qū)未發(fā)現(xiàn)雙側(cè)對(duì)稱(chēng)性海綿狀空泡病變,則用免疫組織化學(xué)方法做進(jìn)一步診斷。
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