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離心技術(shù)種類及在檢驗(yàn)中應(yīng)用

離心技術(shù)在生化檢驗(yàn)中的應(yīng)用主要有兩方面:

①對懸浮液中顆粒的分離,如從全血中分離血清、血漿等;

②分離兩種密度不同液相,如從有機(jī)溶劑和水的混合物中分離出有機(jī)相等。

1.普通離心法:可用來分離細(xì)胞、細(xì)胞膜或細(xì)胞碎片。

2.差速離心法:又稱差級離心法,其原理是交替使用低速或高速離心,也可采用逐漸增加離心速度的辦法,通過不斷增加相對離心力使一個非均勻混合液內(nèi)的大小、形狀不同的粒子分部沉淀。由于分辨率不高,常用于定性分離手段之前的粗制品提取。

3.密度梯度離心法:比差速離心法復(fù)雜,但該法具有很高的分辨率,可以同時使樣品中的各個組分得到分離。其做法是將樣品放在密度梯度介質(zhì)中進(jìn)行離心??煞譃椋?/p>

1)速率區(qū)帶離心法:

根據(jù)分離的粒子在梯度液中沉降速度的不同,使具有不同沉降速度的粒子處于不同的密度梯度層內(nèi)分成一系列區(qū)帶,達(dá)到彼此分離的目的。離心前在離心管內(nèi)裝入密度梯度介質(zhì)(如蔗糖、甘油、KBr、CsCl等),待分離的樣品鋪在梯度液的頂部、離心管底部或梯度層中間,同梯度液一起離心。離心后在近旋轉(zhuǎn)軸處的介質(zhì)密度最小,離旋轉(zhuǎn)軸最遠(yuǎn)處介質(zhì)的密度最大。一般用于分離大小相異而密度相同的物質(zhì)。

2)等密度區(qū)帶離心法:

離心前預(yù)先配制介質(zhì)的密度梯度,待分離的樣品鋪在梯度液頂部或與梯度液混合,當(dāng)梯度液由于離心力作用逐漸形成低濃度而管頂稀的密度梯度,同時,原來分布均勻的粒子也發(fā)生重新分布。當(dāng)管底介質(zhì)的密度大于粒子的密度時,粒子上浮。此法常用于分離大小相似而密度差異較大的物質(zhì)。

4.分析性超速離心

主要是為了研究生物大分子的沉降特性和結(jié)構(gòu),如測定大分子的相對分子量、生物大分子的純度估計、分析生物大分子中的構(gòu)象變化等。

喬巴呦 發(fā)表于 2013-06-14 19:44:39 內(nèi)容:

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