檢驗(yàn)主管:《答疑周刊》2020年第53期
《微生物學(xué)及檢驗(yàn)》重要考點(diǎn)(二)
1.常用的堿性染料有堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫、亞甲藍(lán)等。
2.常用的酸性染料有伊紅、剛果紅等。
3.電離后顯色離子帶正電荷,易與帶負(fù)電荷的被染物結(jié)合。由于細(xì)菌的等電點(diǎn)在pH2~5之間,在堿性、中性、弱酸性的環(huán)境中細(xì)菌均帶負(fù)電荷,易與帶正電荷的染料結(jié)合而著色。
4.培養(yǎng)基種類:
(1)基礎(chǔ)培養(yǎng)基:含有基礎(chǔ)生長(zhǎng)所需的基本營(yíng)養(yǎng)成分,最常用的是肉浸液,俗稱肉湯,主要成分含牛肉浸液和蛋白胨。基礎(chǔ)培養(yǎng)基廣泛用于細(xì)菌的增菌、檢驗(yàn),也是制備其他培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分。
(2)營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基:在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中可加入葡萄糖、血液、生長(zhǎng)因子等特殊成分,供營(yíng)養(yǎng)要求較高的細(xì)菌和需要特殊生長(zhǎng)因子的細(xì)菌生長(zhǎng)。最常用的是血瓊脂平板、巧克力血平板等。
(3)鑒別培養(yǎng)基:利用細(xì)菌分解糖類和蛋白質(zhì)的能力及其代謝產(chǎn)物的不同,在培養(yǎng)基中加入特定的作用底物和指示劑,觀察細(xì)菌生長(zhǎng)過(guò)程中分解底物所釋放的不同產(chǎn)物,通過(guò)指示劑的反應(yīng)不同來(lái)鑒別細(xì)菌。例如糖發(fā)酵管、克氏雙糖鐵瓊脂(KIA)、伊紅-亞甲藍(lán)瓊脂和動(dòng)力-吲哚-尿素(MIU)培養(yǎng)基等。
(4)選擇培養(yǎng)基:在培養(yǎng)基中加入抑制劑,去抑制標(biāo)本中的雜菌生長(zhǎng),有助于所選擇的細(xì)菌種類的生長(zhǎng)。例如培養(yǎng)腸道致病菌的SS瓊脂,其中的膽鹽能抑制革蘭陽(yáng)性菌,枸櫞酸鈉和煌綠能抑制大腸埃希菌,因而使致病的沙門菌、志賀菌容易分離到。
(5)特殊培養(yǎng)基:包括厭氧培養(yǎng)基和細(xì)菌L型培養(yǎng)基等。前者是培養(yǎng)專性厭氧菌的培養(yǎng)基,除含營(yíng)養(yǎng)成分外,還加入還原劑以降低培養(yǎng)基的氧化還原電勢(shì),如皰肉培養(yǎng)基、巰基乙醇酸鈉培養(yǎng)基等。后者是針對(duì)細(xì)胞壁缺損的細(xì)菌L型,由于胞內(nèi)滲透壓較高,故培養(yǎng)基必須采用高滲低瓊脂培養(yǎng)基。
5.細(xì)菌的接種與分離技術(shù):
(1)常用的平板劃線分離法有以下兩種:①連續(xù)劃線分離法:此法主要用于雜菌不多的標(biāo)本。②分區(qū)劃線分離法:本法適用于雜菌量較多的標(biāo)本。
(2)斜面接種法:該法主要用于單個(gè)菌落的純培養(yǎng)、保存菌種或觀察細(xì)菌的某些特性。
(3)液體接種法:多用于一些液體生化試驗(yàn)管的接種。
(4)穿刺接種法:此法主要用于半固體培養(yǎng)基、明膠及雙糖管的接種。
(5)傾注平板法:測(cè)定牛乳、飲水和尿液等標(biāo)本細(xì)菌數(shù)時(shí)常用此方法。
(6)涂布接種法:常用于紙片法藥物敏感性測(cè)定,也可用于被檢標(biāo)本中的細(xì)菌計(jì)數(shù)。
6.血瓊脂平板上的溶血分類:
(1)α溶血:菌落周圍血培養(yǎng)基變?yōu)榫G色環(huán)狀;紅細(xì)胞外形完整無(wú)缺。
(2)β溶血:紅細(xì)胞的溶解在菌落周圍形成一個(gè)完全清晰透明的環(huán)。
(3)γ溶血:菌落周圍的培養(yǎng)基沒有變化;紅細(xì)胞沒有溶解或無(wú)缺損。
(4)雙環(huán):在菌落周圍完全溶解的暈圈外有一個(gè)部分溶血的第二圓圈。
7.細(xì)菌的生物化學(xué)試驗(yàn)章節(jié)內(nèi)容均需要掌握。
8.自動(dòng)血培養(yǎng)檢測(cè)系統(tǒng)的基本原理是檢測(cè)細(xì)菌和真菌生長(zhǎng)時(shí)所釋放的二氧化碳(CO2)來(lái)作為血液中有無(wú)微生物存在的指標(biāo)。
9.葡萄球菌:
(1)本屬菌革蘭染色陽(yáng)性,形似葡萄串狀。觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性。
(2)抵抗力:對(duì)理化因素抵抗力強(qiáng),耐熱,耐干燥,耐高鹽,是抵抗力最強(qiáng)的無(wú)芽胞細(xì)菌。
(3)致病性:①食物中毒,急性胃腸炎;②燙傷樣皮膚綜合征;③中毒性休克綜合征;④葡萄球菌性腸炎。
(4)金黃色葡萄球菌:觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性、血漿凝固酶試驗(yàn)陽(yáng)性、甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)陽(yáng)性、對(duì)新生霉素敏感。
表皮葡萄球菌:觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性、血漿凝固酶試驗(yàn)陰性、對(duì)新生霉素敏感。
腐生葡萄球菌:觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性、血漿凝固酶試驗(yàn)陰性、對(duì)新生霉素耐藥。
10.鏈球菌屬:
(1)A群鏈球菌對(duì)桿菌肽敏感;B群鏈球菌CAMP試驗(yàn)陽(yáng)性,可水解馬尿酸鈉;七葉苷試驗(yàn)陽(yáng)性用于鑒定D群鏈球菌;α-溶血性鏈球菌對(duì)optochin耐藥,不被膽汁溶解,不分解菊糖,可與肺炎鏈球菌相鑒別。
(2)根據(jù)鏈球菌在血平板上溶血情況分為三類:
1)甲型(α)溶血性鏈球菌:菌落呈灰色針尖狀,菌落周圍有1~2mm寬的草綠色溶血環(huán),故又稱草綠色鏈球菌。本菌為條件致病菌。
2)乙型(β)溶血性鏈球菌:通稱溶血性鏈球菌,菌落較小,灰白色,菌落周圍有2~4mm寬的透明溶血環(huán)。該型細(xì)菌致病性最強(qiáng),常引起人和動(dòng)物多種疾病。
3)丙型(γ)鏈球菌:呈灰白色細(xì)小菌落,在菌落周圍無(wú)溶血環(huán)。一般無(wú)致病性。
(3)猩紅熱多由A群鏈球菌感染所致。草綠色鏈球菌常與亞急性心內(nèi)膜炎相關(guān)。
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